-SABC(兔IgG)-FITC(POD) kit-切片与免疫组化-蛋白与免疫

2023-10-29

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SABC(兔IgG)- FITC(POD)kit品牌: | 货号:SA0025

英文名称SABC(Rabbit IgG)-FITC(POD) Kit

产品内容:

封闭液(5% BSA) 10ml

Bio-羊抗兔IgG浓缩液 100ul

SABC-FITC浓缩液 100ul

SABC-POD浓缩液 100ul

稀释液 30ml

20×DAB显色液A 1ml

20×DAB显色液B 1ml

抗荧光衰减封片剂 10ml

保存: 如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,稀释液,20×DAB显色液B和抗荧光衰减封片剂存放于2-8℃以方便使用。

产品简介: 本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验.DAB及FITC显色。 SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin—BiotinComplex,SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。

操作步骤:(以石蜡切片热修复为例)1. 切片常规脱蜡至水。3%H2O2室温5-10分钟以灭活内源性酶(如果FITC,可省掉此步)。蒸馏水洗3次。 2. 热修复抗原:将切片浸入0.01M 枸橼酸盐缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5-10分钟后,反复1-2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1-2次。3. 滴加5%BSA封闭液,室温20分钟。甩去多余液体, 免洗。4. 用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗,37 ℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间)。5. 根据使用量,用稀释液将bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ulbio-羊抗兔IgG浓缩液,混匀即成工作液,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗兔IgG工作液,20-37℃处理30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。如果用荧光观察,请接步骤6、7,如果用DAB显色,请直接转至步骤8。6. 根据使用量,用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ulSABC-FITC浓缩液,混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-FITC工作液,20-37℃,30分钟(避光)。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。7. 滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。8. 根据使用量,用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10ulSABC-POD浓缩液,混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周).滴加SABC-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。9.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50ul20×DAB显色液A,加入50ul 20×DAB显色液B ,混匀后加至切片。室温显色, 镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。10. 苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞爬片: 常规固定后,PBS漂洗两次,再用0.5%TxitonX-100室温20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2(如果用FITC,刚可省掉此步)处理15分钟;PBS漂洗两次,下接上面第4步。对于冰冻切片: 固定后,可用PBS漂洗两次,再接上面第二步。

注意事项: 如果用DAB染色背景过高,在SABC反应之后,DAB显色之前,用加有0.01-0.02%TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。 如果用FITC观察背景过高,在SABC反应之后,用加有0.01—0.02%TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗涤2次,然后封片观察。 因为免疫组化指标众多,标本不一,此步骤仅作参考。

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