品牌: biomics
公司: 百奥迈科生物技术有限公司
提供商: Biomics Biotech 服务名称: 实时荧光定量PCR技术服务(普通基因,siRNA,microRNA ) 规格: 180元/样
规格: | 产品价格: | ¥180.0
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产品价格: | ¥180.0 产品详情请联系金山科研平台微信:jinshanbio
实时荧光定量PCR(Real Time PCR,qRT-PCR)避免了传统PCR 以终产物检测定量产生的偏差,提高实验的重复性。与常规PCR 相比,实时荧光定量PCR 具有特异性更强、有效解决PCR 污染问题、自动化程度高等特点,已成为国际公认的核酸分子定量的标准方法。该技术已被广泛用于检测细胞mRNA 表达量的变化;比较不同组织的mRNA 表达差异;验证基因芯片,siRNA 干扰的实验结果。它涉及到DNA或RNA 样品制备,反转录及PCR 反应等一系列重要的分子生物学过程。
配套产品:qPCR实时荧光定量一步法试剂盒BK2100BK BK2100
设计目的片段和内参基因的qPCR引物:利用Primer5.0等软件设计PCR引物及探针。我们公司免费为客户设计引物和探针。
SYBR Green 法1)建立以下反应体系试剂(SYBR Green法)量总RNA 根据实验qPCR mix(包含MLV、Hot-start Taq、dNTP等 ) 终浓度为1×SYBR Green I solution 终浓度为1×上游引物,10μM 终浓度:~200 nM下游引物,10μM 终浓度:~200 nMMgCl2 根据实验RNase-Free H2O To 25.0 μl
2) PCR 反应条件如下:步骤 循环数 步骤温度 时间逆转录 1 1 42 oC 30 min失活MLV,激活Taq 1 1 95 oC 10 min1 95 oC 15 sec2 X oC* 实时荧光定量PCR 40 30 sec3 72 oC 30 sec*与引物的Tm 相关3) 取5μl PCR 产物跑1.5%琼脂糖凝胶电泳,或做溶解曲线,检测PCR 产物的特异
荧光图谱
Taqman 法1) 建立以下反应体系试剂(Taqman法) 量总RNA 根据实验qPCR mix(包含MLV,Hot-start Taq、dNTP等 )终浓度为1×Taqman Probe 根据实验上游引物,10μM 终浓度:~200 nM下游引物,10μM 终浓度:~200 nMMgCl2 根据实验RNase-Free H2O To 25.0 μl
2) PCR 反应条件如下:步骤 循环数 步骤温度 时间逆转录 1 1 42 oC 30 min失活MLV,激活Taq 1 1 95 oC 10 min1 95 oC 15 sec实时荧光定量PCR 402 60 oC* 1 min3实验完毕之后,将数据导入到Excel 中进行数据分析。4.结果分析:利用ΔΔCt 法,相对定量,将目的基因的表达与看家基因的表达对比,获得沉默效果。
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