RNeasy Mini Kit (250)凯杰Qiagen试剂盒

RNeasy Mini Kit可从细胞、组织或酵母中快速纯化高品质RNA，硅胶膜RNeasy离心柱的结合能力达100μg RNA。使用RNAlaterRNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent可方便的稳定组织样本，使用TissueRuptor或TissueLyser体系可有效的破碎组织。可在QIAcube全自动核酸纯化仪上应用RNeasy Mini Kit实现RNA纯化自动化。处理更小或更大的样本，可使用RNeasy Micro Kit（离心柱结合能力为45µg RNA）、RNeasy Midi Kit（离心柱结合能力为1mg RNA）和RNeasy Maxi Kit（离心柱结合能力为6mg RNA）。

RNeasy Mini实验方案。

使用RNeasy Mini Kit纯化的总RNA具有高质量，适用于多种下游操作。实验方案还包括部分纯化的RNA、体外转录本和酶反应RNA的回收。不提供溶壁酶、酵母裂解酶或玻璃珠（酵母样本需要）。因样本来源的发育阶段、种属和生长条件的不同，从样本中分离的RNA量也各异。由于RNA酶步骤富集的RNA种属>200 nt，因此RNA产量不包括5S rRNA、tRNA或其他低分子量RNA。

从多种样本中纯化高品质RNA。

使用RNeasy Maxi Kit纯化的总RNA的甲醛琼脂糖凝胶电泳和northern印迹。从各种来源的样本中分离总RNA（10 µg）上样至各泳道。所有组织均来源于小鼠。酵母：Saccharomyces cerevisiae；E. coli菌株：HB101。32P标记的探针识别的（G）GAPDH；（E）翻译延长因子EF-1α；和（O）外膜蛋白A序列。（E和O分别由瑞士巴塞尔大学的P. Philippsen和德国蒂宾根马克斯-普朗克生物学研究所的U. Henning提供。）B. subtilis未采用探针检测。M：0.24–9.5 kb RNA分子量标准。胚胎、Huh7和HeLa细胞泳道中的7.5 kb条带（图示）为核前体RNA。

对少至100个细胞的RNA进行RT-PCR。

使用RNeasy Mini Kit从图示数目的HeLa细胞中分离的总RNA的RT-PCR。使用不含RNA酶的DNA酶酶切10 µl（1/5）洗脱液，并使用oligo-dT引物进行逆转录。使用2.5 µl（1/20）的cDNA混合物进行50 µl PCR。扩增452 bp的GAPDH片段。C-：阴性对照；C+：阳性对照；M：100 bp分子量标准。

RNeasy Mini离心柱。

RNeasy Mini Kit中提供RNeasy Mini离心柱。

RNeasy Mini Kit (250)凯杰Qiagen试剂盒

性能

RNeasy Mini Kit可从至多30mg动物或人类组织样本，或从100–1 x 10⁷个动物或人类细胞样本或酵母中纯化总RNA。

RNeasy Mini Kit纯化得到的总RNA产量

样本来源	起始材料	平均产量（µg）
动物细胞LMHHeLaCOS-7淋巴细胞（未受激）	1x 1061x 1061x 1061x 106	1215350.5
小鼠组织肝肺脾	10mg10mg10 mg	401035
真菌细胞S. cerevisiae	1x 107	25

原理

RNeasy Mini Kit可从少量的样本中高效纯化总RNA。RNeasy纯化技术整合了ben酚/异硫氰酸胍裂解的严谨性和硅胶膜纯化的速度和纯度，简化了总RNA纯化技术。纯化得到高品质的RNA，并且DNA残留水平达到zui低。

操作流程RNeasy Mini Kit可从10–1 x 10⁷个动物或人类细胞中、0.5–30mg动物或人类组织中或小于5 x 10⁷个酵母细胞中方便的纯化总RNA。先对样本进行破碎和匀浆。在裂解物中加入乙醇以提供合适的结合条件。然后将裂解物上样至RNeasy硅胶膜。RNA结合到膜上（最多可结合100µg），污染物被高效洗去。对于某些对少量DNA十分敏感的RNA应用，可在RNeasy操作过程中进行柱上DNA酶处理，去除DNA残留。之后可在30–100µl的纯水洗脱液中得到高浓度的纯化RNA。还有各种特殊应用的实验方案可供选择。应用

使用RNeasy技术纯化得到的RNA的A_260/280比为1.9–2.1（10mM Tris­·Cl、pH 7.5的溶液中），适用于多种下游应用，包括：

Northern印迹、点印迹和狭缝印迹终点式RT-PCR定量real-time RT-PCR芯片分析Poly A+RNA筛选

特点	参数
Applications	PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
Elution volume	30–100 µl
Format	Spin column
Main sample type	Tissue, cells
Processing	Manual (centrifugation)
Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein	Total RNA
Sample amount	0.5–30 mg
Technology	Silica technology
Time per run or per prep	20 minutes
Yield	Varies