BD细胞凋亡双染试剂盒AnnexinV-FITC/PI简单介绍：

在正常细胞中，***脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡zui早期，膜***脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧，这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DN**断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。AnnexinV是一种***脂结合蛋白，与***脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的***脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此AnnexinV被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。***化丙***（Propidium Iodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

BD细胞凋亡双染试剂盒AnnexinV-FITC/PI

组成成分：

Product code Description556547 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit IComponents:556547a Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E556547b Annexin V-FITC (51-65874X)556547c Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)

操作步骤：

贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化。注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度。如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须*清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤，清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合，影响Annexin V的结合。（1）用去离子水将10×Binding Buffer稀释成1×Binding Buffer；（2）细胞收集。悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上***脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合），于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；（3）细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 悬浮细胞；（5）Annexin V-FITC标记：加入5μL的Annexin V-FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟；（6）PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色。（7）上机前，补加200μL的1×Binding Buffer。

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