本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B，在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，然后通过离心得到细胞核沉淀。zui后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒可以抽提50个样品，如果每个样品的数量为约二百万细胞或约60毫克组织。

包装清单：

使用说明：

1. 准备溶液：温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽

提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试

剂备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的zui终浓度为1mM。

2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，

并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，尽zui大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶

消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。

3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽zui大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。（对于二百万Hela细胞，其细胞

沉淀的体积大约为20微升或40毫克。）

5. zui高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀*悬浮并分散开。（如果细胞沉淀没有*悬浮并分散开，可

以适当延长vortex时间。）

6. 冰浴10-15分钟。

7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。zui高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。

8. zui高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g离心5分钟。

9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用，也可以冻存。（千

万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。）

10. 对于沉淀，*吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。（不吸尽上清会

带来细胞浆蛋白的污染。）

11. zui高速剧烈Vortex 15-30秒，把细胞沉淀*悬浮并分散开。然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高速

剧烈Vortex 15-30秒，共30分钟。

12. 4℃ 12,000-16,000g离心10分钟。

13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用，也可以-70℃冻

存。

14. 对于新鲜组织：

A. 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A和B（例

如200微升细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10微升抽提试剂B）。并加入PMSF至zui终浓度为1mM配制成

组织匀浆液。按照每60mg组织加入200微升组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液，并在玻璃

匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。

B. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内，冰浴放置15分钟。

C. 4℃ 1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中，为抽提得到的部分细胞浆蛋白。（吸上

清时千万不要触及沉淀。）

D. 对于沉淀，到了这一步已经充分匀浆，但很多细胞还没有破碎。接下去按照使用说明的步骤4开

始操作，即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作，按照步骤4至步骤13抽提得到细胞浆蛋

白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤14C中抽提得到的细胞浆蛋白合并。

保存条件：

-20℃保存，一年有效。

注意事项：

需自备PMSF。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入，以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF（ST506）可以向碧云天订购。

抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

本试剂盒对于组织样品，仅适合于新鲜组织，对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。

使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用BCA蛋白浓度测定试剂盒（P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S）测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。