细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒P0027现货促销

2023-08-20

本试剂盒是通过细胞浆蛋白抽提试剂A和B,在低渗透压条件下,使细胞充分膨胀,然后破坏细胞膜,释放出细胞浆蛋白,然后通过离心得到细胞核沉淀。zui后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。

本试剂盒可以抽提50个样品,如果每个样品的数量为约二百万细胞或约60毫克组织。

包装清单:

产品编号

产品名称

包装

P0027-1

细胞浆蛋白抽提试剂A

10ml

P0027-2

细胞浆蛋白抽提试剂B

0.5ml

P0027-3

细胞核蛋白抽提试剂

2.5ml

说明书

1份

使用说明:

1. 准备溶液:温融解试剂盒中的三种试剂,溶解后立即放置在冰上,混匀。取适当量的细胞浆蛋白抽

提试剂A备用,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。取适当量的细胞核蛋白抽提试

剂备用,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。

2. 对于贴壁细胞:用PBS洗一遍,用细胞刮子刮下细胞,或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧,

并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞,尽zui大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。尽量避免用胰酶

消化细胞,以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。

3. 对于悬浮细胞:用PBS洗一遍,离心收集细胞,尽zui大努力吸尽上清,留下细胞沉淀备用。

4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞,其细胞

沉淀的体积大约为20微升或40毫克。)

5. zui高速剧烈Vortex 5秒,把细胞沉淀*悬浮并分散开。(如果细胞沉淀没有*悬浮并分散开,可

以适当延长vortex时间。)

6. 冰浴10-15分钟。

7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。zui高速剧烈Vortex 5秒,冰浴1分钟。

8. zui高速剧烈Vortex 5秒,4℃ 12,000-16,000g离心5分钟。

9. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞浆蛋白。可以立即使用,也可以冻存。(千

万不要触及沉淀,可以在沉淀上方保留极小体积的上清,以免触及沉淀。)

10. 对于沉淀,*吸尽残余的上清,加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。(不吸尽上清会

带来细胞浆蛋白的污染。)

11. zui高速剧烈Vortex 15-30秒,把细胞沉淀*悬浮并分散开。然后放回冰浴中,每隔1-2分钟再高速

剧烈Vortex 15-30秒,共30分钟。

12. 4℃ 12,000-16,000g离心10分钟。

13. 立即吸取上清至一预冷的塑料管中,即为抽提得到的细胞核蛋白。可以立即使用,也可以-70℃冻

存。

14. 对于新鲜组织:

A. 把组织尽可能切成非常细小的碎片。按照20:1的比例混合适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A和B(例

如200微升细胞浆蛋白抽提试剂A中加入10微升抽提试剂B)。并加入PMSF至zui终浓度为1mM配制成

组织匀浆液。按照每60mg组织加入200微升组织匀浆液的比例混合组织和组织匀浆液,并在玻璃

匀浆器内充分匀浆。匀浆需在冰浴或4℃进行。

B. 匀浆后把匀浆液转移到塑料离心管内,冰浴放置15分钟。

C. 4℃ 1,500g离心5分钟。把上清转移至一预冷的塑料管中,为抽提得到的部分细胞浆蛋白。(吸上

清时千万不要触及沉淀。)

D. 对于沉淀,到了这一步已经充分匀浆,但很多细胞还没有破碎。接下去按照使用说明的步骤4开

始操作,即把沉淀当做已经离心收集好的细胞沉淀操作,按照步骤4至步骤13抽提得到细胞浆蛋

白和细胞核蛋白。抽提得到的细胞浆蛋白可以和步骤14C中抽提得到的细胞浆蛋白合并。

保存条件:

-20℃保存,一年有效。

注意事项:

需自备PMSF。PMSF一定要在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入,以免PMSF在水溶液中很快失效。PMSF(ST506)可以向碧云天订购。

抽提蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

本试剂盒对于组织样品,仅适合于新鲜组织,对冻存过的组织抽提效果很差。可以抽提的组织样品数通常不足100个。

使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

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