原理

　　为获得准确的real-time RT-PCR基因表达分析结果，很重要的是仅扩增和检测cDNA。基因组DNA的干扰可通过设计横跨外显子/外显子边界的引物或探针避免。尽管如此，在某些特殊情况下(如：cDNA来自一个单外显子基因)，起始RNA样品必须无基因组DNA。

　　使用QuantiTect Reverse Transcription Kit，基因组DNA污染物可使用*的gDNA去除缓冲液迅速有效的去除。因为纯化RNA样品后无需另外采用DNA酶消化，从而可节省时间和费用。并且也无需设计RNA特异性引物和探针。

　　应用

　　QuantiTect Reverse Transcription Kit可从各种类型的起始样品中合成cDNA以实现高效和高灵敏度的real-time RT-PCR，包括激光显微切割样品和活组织切片样品。与其他供应商提供的试剂相比，QuantiTect Reverse Transcription Kit在检测低丰度基因时具有更高的灵敏度(见图：“Real-Time，两步法RT-PCR精确度更高”)。

　　为获得高特异性和高灵敏度的real-time RT-PCR结果，又避免耗时的反应步骤优化过程，我们推荐QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect产品联合使用。包括经优化的PCR反应预混液和即用型引物，使用SYBR Green染料法或序列特异性探针法进行 real-time RT-PCR。