人HE4测定试剂盒96T（酶联免疫吸附法）

人HE4测定试剂盒96T（酶联免疫吸附法）

实验原理

HE4 EIA是一种非竞争性的夹心酶联免疫方法。它通过两种小鼠单克隆抗体，即2H5和3D8，直接针对于HE4结构域中C-WFDC的两个抗原决定簇位点。操作时将标准品、质控品及患者标本和生物素标记的抗HE4鼠单克隆抗体（MAb）2H5滴加至链霉亲和素包被的微孔板中一起温育。在温育过程中，标准品或患者标本中存在的HE4抗原通过生物素标记的抗HE4单克隆抗体（MAb）吸附到链霉亲和素包被的微孔板上。随后清洗微孔

板，加入HRP标记的抗HE4单克隆抗体3D8进行温育反应。经过第二次清洗后，向每孔加入底物/显色缓冲液（过氧化氢和3,3',5,5'四甲基联苯胺）使其发生酶促反应。在酶促反应过程中如果抗原存在则会显示为蓝色。其颜色的深度与标本中HE4的含量呈正比。微板孔中颜色的深度可用酶标仪在620nm （也可选择加入终止液后在405 nm ）进行检测。

每次试验后均需根据每个标准品的浓度与其相对应的吸光度数值绘制标准曲线，患者标本中的HE4浓度即可从标准曲线上读出。

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