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　　宿主细胞DNA(Host Cell Proteins)对于具有商业规模的生物药品中，治疗性蛋白药物在细胞培养中的表达是一种比较便宜有效的方法。但是这些产品在生产和纯化过程中，很容易引起宿主细胞DNA残余污染。尽管残余宿主细胞DNA对治疗性蛋白药物的影响在很大程度上还是未知的，但是也有研究表明宿主细胞DNA可能包含一些有害的DNA片段，使其具有传染性和致瘤性。因此，在生物制药中，对宿主细胞DNA的检测是非常有必要的。 Wako（日本和光纯药）对于生物制药中的宿主细胞DNA残留，可提供以下试剂： DNA Extractor^® Kit

295-50201 50tests

特点

可与Threshold系统配合使用进行 能用于生物制药、血清中的DNA提取 单独的离心管无交叉污染，提取的核酸可应用于下游实验 可获得高质量高回收率的DNA 使用的方法为碘化钠法（Sodium Iodide Method），比传统的方法更为环保 高灵敏度，可提取低至10pg的DNA

◆DNA Extractor^® Kit实验方案

方案1：血清中DNA提取操作步骤

试剂准备：

1） DNA提取之前，试剂提取如下：

26mL碘化钠溶液加入6mL蒸馏去离子水稀释，

再加入1mL月桂酰肌氨酸钠和65μL糖原溶液并混合均匀。

2） 向洗涤溶液（B）加入2μL糖原溶液并立即混合均匀。

注意事项：

1）用于稀释Nal溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。

2）配制好的洗涤溶液（B）在 4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液（B），加入糖原 溶液到无菌离心管中至

　 合适体积即可。

3）在保存期间Nal溶液会结晶，加热溶液至50℃可帮助溶解。 DNA提取步骤：

1）吸取100μL的血清样品加入1.5mL微量离心管；

2）再加入300μL配制好的Nal溶液至离心管并混合均匀；

3）将离心管在60℃恒温容器中加热15分钟；

4）取出离心管，加入400μL异丙醇至离心管并混合均匀；

5）离心管在室温静置15分钟后离心10,000g 15分钟；

6）尽可能多地吸取上清液，将离心管倒置在纸面上除去残留溶液；

7）加入1mL配制好的洗涤溶液（B）重悬浮得到的白色沉淀，并使白色沉淀从离心管壁上弹开；

8）短暂离心10,000g 5min，去除上清液，将剩余沉淀真空干燥，用于后续的DNA分析。

方案 2: Threshold* 系统DNA定量法的预处理

试剂预处理 :

1） 将65μL糖原溶液加入26mL碘化钠溶液；

2） 将2μL糖原溶液加入40mL洗涤溶液（B），立即混合均匀。

注意事项：

1） 用于稀释碘化钠溶液的蒸馏去离子水须去除DNA。

2） 配制好的洗涤溶液（B）在 4℃至少能保存一周。如果需要少量的洗涤溶液（B），加入糖原溶液到无

　 菌离心管中至合适体积即可。

3） 在保存期间碘化钠溶液会结晶，加热溶液至50℃可帮助溶解。

4） 提取步骤应在DNA变性之前，因此重要的是使用无菌技术尽可能降低DNA污染。预先包装好的无

　 菌吸管、无菌试管和手套都要经过此步骤。

DNA提取步骤：

1） 吸取400μL或500μL的样品加入2mL无菌带盖微量离心管并混合均匀；

2） 吸取20μL的月桂酰肌氨酸钠溶液加入微量离心管并混合均匀；

3） 再加入500μL包含糖原的碘化钠溶液至混合溶液，涡旋后在40℃保温15分钟；

4） 加入900μL异丙醇至混合溶液，涡旋后静置于室温15分钟；

5） 短暂离心10,000g 15min后，能看见管壁有白色沉淀，吸取上清液后将离心管倒置于纸面去

　 除残留溶液；

6） 加入800μL 洗涤溶液（A）至离心管，剧烈涡旋使白色沉淀从离心管壁上弹开；

7） 短暂离心10,000g 5min后，去除残留溶液；

8） 加入1500μL包含糖原的洗涤溶液（B）至离心管并涡旋，短暂离心10,000g 5min后吸取上清液，

　 剩余的白色沉淀包括DNA和糖原载体；

9） 加入分析用缓冲液 (Zero Calibrator buffer) 使白色沉淀溶解，用于后续的DNA分析。

注意事项：

请于各步骤使用搅拌器将溶液搅拌均匀。样品溶液里含有DNA酶时，进行步骤2之前请先进 行步骤3。步骤4里样品溶解不完全时，请把保温温度升至40-60℃帮助溶解。但是含有部分蛋白（γ- 球蛋白）或高浓度蛋白的样品（＞50mg/mL），加热可能会导致蛋白聚集，请注意。

* 为Molecμlar Devices公司注册商标，是使用生物传感器的高灵敏度分析装置。

参考文献

1. Ishizawa, M., Kobayashi, Y., Miyamura, T. and Matuura,: Simple Procedure of DNA isolation from human seru

Nucleic Acids Res., 19, 5792 (1991)

相关资料：

DNA Extractor^® Kit

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