8周标准兔多抗制备佐剂-蛋白与免疫

2023-10-29

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8周标准兔多抗制备佐剂

别名8周标准兔多抗制备佐剂
英文名称SoFastAntibody-Rabbit8W
储存条件2-8ºC 切勿冻存!
单位

用途:

通过 8 周 3 针的标准免疫程序制备兔子多克隆抗体, ELISA 滴度 (Cutoff 值为 0.1000)可达到 1:10000-1:1000000。

备注:

常温运输,2-8ºC 保存,无菌取用,有效期 12 个月。(切勿冻存!)

使用方法:

1. 用生理盐水将抗原稀释到 2 倍最终浓度(按每针次 100μl 用量配制)。备注:推荐使用的抗原用量为(1)免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次 20-50μg;(2)免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次 5-10μg。

2. 充分混匀佐剂,无菌条件下取出所需用量(按每针次 100μl )与抗原按体积比 1:1 迅速混匀。备注:本佐剂产生沉淀属正常现象,与抗原混合操作越快越好。

3. 通过后腿小腿肌肉注射免疫兔子,每只兔子注射 200μl 。备注:(1)本佐剂与抗原混合后产生沉淀属正常现象, 抽入针管前应充分混匀, 抽入针管后应尽快注射;(2)客户也可根据各自的实验习惯选择皮下注射或皮内注射进行免疫。

4. 第 21 天和第 42 天按同样方式分别加强免疫 1 针。备注:每次佐剂和抗原现配现用,注射部位同初次免疫。

5. 第 52-56 天采微量血进行 ELISA 测定,抗体滴度应在 1:10000-1:1000000 范围内,随后即可大量采血.

与常规使用的弗氏佐剂相比,SoFastAntibody免疫佐剂具有免疫周期短、针次少、无需乳化、抗原用量低、抗体滴度高、抗体亲合力高、易获得构象型表位的抗体等多方面优点,详述如下:

1.SoFastAntibody只需两针免疫,无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备,与弗氏佐剂相比可减少免疫针次。

2.SoFastAntibody通过减少免疫针次和降低每针次抗原用量,从而可大大节省总抗原用量。推荐使用的抗原用量为(1)免疫原性较弱的亚单位蛋白抗原每针次5-50μg(通常为小鼠5-20μg,兔子20-50μg);(2)免疫原性较强的灭活全病毒或全细菌以及病毒样颗粒抗原每针次1-10μg(通常为小鼠1-5μg ,兔子5-10μg)。

3.SoFastAntibody抗体产生快,抗体滴度高,抗体亲合力高。以标准免疫程序为例,无论是用于单克隆还是多克隆抗体制备,只需要在三周内进行两针免疫,通常在第五周即可获得ELISA滴度(Cutoff值为0.1000)高达1:10000-1:10000000的高亲合力抗体水平。

4.SoFastAntibody不破坏抗原天然构象,从而易于筛选获得针对构象型抗原表位的单克隆抗体,这是弗氏佐剂所不具备的一个重要特点。

5.SoFastAntibody是一类水溶性佐剂,使用时不需要弗氏佐剂的复杂乳化过程,抗原和佐剂只需简单混合即可用于免疫动物。

6.SoFastAntibody使用肌肉免疫途径,与常规小鼠单克隆抗体制备过程中使用足垫免疫或脾内免疫相比,极大地方便了使用。

7.SoFastAntibody的一个重要用途是可方便地用于制备小鼠多克隆抗体。常规多克隆抗体制备多使用兔子,不但免疫针次多、抗原用量大和抗体产生慢,而且由于技术要求较高而往往需要委托专门单位制备。使用SoFastAntibody免疫佐剂,任何实验动物人员均可方便快速地制备小鼠多克隆抗体,标准免疫程序只需要简单地免疫5只小鼠,即可在五周后获得1ml高质量的小鼠多克隆抗体。(强烈推荐使用本佐剂制备小鼠多克隆抗体,1ml高质量的小鼠多克隆抗体足以满足绝大多数用户的实验需求,包括用于酶联免疫、免疫印迹、流式细胞、免疫组化和免疫沉淀等)。

8.SoFastAntibody建议常温运输,2~8ºC保存,无菌取用,有效期12个月。

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