磷酸化蛋白提取试剂盒-蛋白提取/定量-蛋白与免疫
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磷酸化蛋白提取试剂盒| 储存条件 | -20℃ |
|---|---|
| 单位 | 盒 |
磷酸化蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为强烈，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。
产品组成:
| 规格 | 储存条件 |
裂解液 | 100 ml | 2-8 oC |
磷酸酶抑制剂（100x） | 1ml | -20 oC |
蛋白酶抑制剂（100x） | 1 ml | |
PMSF（100x） | 1ml |
操作方法: 1、组织总蛋白的提取 在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF；混匀，放置在冰上备用； 称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作； 将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g离心30min； 吸取上清至新的管中； 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80 oC，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。) 2、细胞总蛋白的提取 裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml； 贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液；在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞， 将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min 悬浮细胞：4 oC 400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液， 涡旋10s，放置冰上裂解10min，重复3-4次； 裂解完毕之后，将细胞裂解液4 oC 12000g离心30min； 将上清移入新的EP管中； 进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80 oC，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)
注意事项： 实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境； PSMF（有毒）现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解；
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