AEC显色试剂盒(20×)-WesternBlot-蛋白与免疫

2023-10-29

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AEC显色试剂盒(20×)

英文名称AEC Peroxidase Substrate Kit,20×
储存条件2-8℃避光保存,复检期至少1年。
单位

内容成分:

溶液A浓缩液(20×)1ml/10ml

溶液B浓缩液(20×)1ml/10ml

溶液C浓缩液(20×)1ml/10ml

产品简介:

AEC底物显色试剂是一种可以通过过氧化物酶催化底物3-氨基-9-乙基咔唑氧化形成红色不溶性产物,以此鉴定过氧化物酶活性,从而确定目标分子表达情况,该种方法权威而经典。其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测(蛋白质免疫印记、免疫组织化学、以及原位杂交染色等)。产品性能稳定,操作便捷,敏感度高,显色清晰,重复性好。

3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethylcarbazole;AEC)是过氧化物酶(Peroxidase)的生色底物,其分子式为C14H14N2,分子量为210.3。在过氧化物酶的催化下,电子供体AEC底物在过氧化氢氧化下,失去电子而呈现出颜色变化和沉积,形成稳定性红色不溶性产物(能溶于有机试剂)。

3-氨基-9-乙基咔唑(3-amino-9-ethylcarbazole,AEC) 是过氧化物酶(Peroxidase) 的生色底物,在过氧化物酶的催化下,过氧化氢氧化AEC形成稳定的红色沉淀产物。该红色产物不溶于水,但溶于有机溶剂。该AEC底物显色试剂盒加入了增强显色试剂,敏感度大大提高。产品操作便捷,显色清晰,重复性好,适用于HRP系统的IHC 和Western Blot实验的酶促显色。

使用说明:

1.工作液配制:

取850ul无菌双蒸水,依次加入50ul溶液A、50 ul溶液B、50ul溶液C、混合均匀,即配成AEC工作液。如需要更大体积工作液,可按相应比例放大。此溶液必须现用现配,配好后避光保存,半小时内使用,过期后请将剩余的液体废弃。

2.显色:

1)蛋白质印迹膜显色:将配制好的工作液滴加在印迹膜上(或将印迹膜浸入AEC工作液中),显色时间一般为10-30min。显色完毕后,将膜浸入蒸馏水中,终止反应。

2)组织切片染色:向组织切片上加入适量AEC工作液,确保能充分覆盖样品。室温孵育10-30 min,避免光照,直至显色至预期深浅。可在显微镜下观察控制显色时间。显色后用蒸馏水洗涤即可终止显色反应。

3)对于组织切片或细胞样品,显色反应终止后,可对其进行其他染料复染。对于膜,显色反应终止后,可以室温晾干避光保存。

注意事项:

1.由于AEC生成的颜色产物为脂溶性,因此用于IHC显色后不适合梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,须用水性封片剂封片。

2.根据情况自行优化实验条件,调整显色时间,获得最佳显色效果。

3.AEC有一定毒性,操作时请采取必要的防护措施。

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