详细描述

高分辨熔解曲线分析（High Resolution Melting analysis，HRM）是利用特定dsDNA染料可以插入DNA双链小沟中的特性，通过实时监测升温过程中dsDNA解链，荧光染料脱落，荧光信号减弱或消失的过程，通过记录DNA荧光信号强度随熔解温度升高的高分辨率变化曲线，得出DNA序列的熔解温度（Tm）差异，对目的DNA片段碱基配对特异性、突变或多态位点进行检测。与常规qPCR实验用SYBR Green I染料标记的熔解曲线分析相比，HRM分析采用的是LC Green, Ly Green, eva Green等饱和染料，不会抑制PCR反应，关键是在dsDNA升温解链时，饱和染料从双链上脱落后不再随机结合到尚未解链的双链DNA空闲小沟位置（即染料分子结合位置的重排），因此，其荧光信号减弱能准确反应出双链DNA的热变性过程样品的Tm值。

HRM作为一种创新、灵敏、PCR扩增反应后进行的分析方法，可用于PCR扩增产物中基因突变扫描、SNP基因分型、插入或缺失片段的鉴别、短串联重复序列分析和甲基化比率检测等多方面研究。

伯乐精确熔点分析软件Precision Melt Analysis Software与CFX Maestro软件相结合，使得CFX Duet、CFX Opus 96、CFX Opus Deepwell、CFX Opus 384系列实时定量PCR仪全面支持包括单一基因分型实验或复杂多板数据研究在内的HRM分析需求。

精确熔点分析软件用户界面更友好、功能更优化，使得结果分析非常简单。大图标按钮、实验向导和新的设置流程，方便新用户快速开始分析文件。针对有经验的用户，软件可以选择自定义的数据分析功能，保正更多的实用性和灵活性。

1、主要特点

HRM分析选项管理器功能，即可以应用聚类分析功能，自动分配样品的基因型，也可以手动自定义设置样本基因型，应用于每个熔点分析的结果文件；

熔点曲线研究根据熔点曲线图，不同峰型、曲线漂移，对含有杂合型SNP位点与其他样本纯合子区分。

反应孔分群功能可以从一块反应板分析多个实验的数据，每一个分群可以根据各自的设置和分析。

可以根据需要将多次运行的熔点实验数据合并进行分析，生成标准的熔点曲线分析文库。无需导出数据即可直接分析实验数据，数量不受限制，通量大；

多图表一个窗口显示功能，一次性利用图表显示所有数据，包括扩增曲线图和分析后的图谱；

用户可以自定义需要分析数据和显示数据，一步就能将任何曲线图、表格或者图形导入到EXCEL电子表格、PowerPoint、打印或保存为PDF文件。

精确熔点分析软件典型HRM工作流程为：

1) 实验方法：HRM分析匹配试剂

为满足精确熔点分析钦件需求，需要使用熔点校准试剂盒(1845020)，在CFX OPUS 96和CFX OPUS 384系统上进行一个校准实验，生成熔点校准文件，导入到精确熔点分析软件（每个文件与每个仪器特异匹配）。

2）实验程序

CFX OPUS 96/CFX OPUS 384运行扩增程序及高分辨率熔解曲线程序：

98℃ for 2 min

98℃ for 2 -5 sec

55-60℃ for 2–10 sec (plate read)

Go to step 2, 39 more times

98℃ for，1min

70℃ for，2min

Melt curve 65℃ - 95℃，increment 0.2℃ 10sec hold (plate read)

3) 打开精确熔点分析软件，导入数据结果文件(.pcrd)，生成.melt文件

4) 分析HRM结果

2、安装运行计算机配置要求

操作系统： windows 7

处理器：不低于1.0 GHz

RAM内存：不低于2 GB RAM

硬盘和外设：不低于20 GB，USB 2.0高速端口

显示器分辨率：不低于1024 x 768 x 256真彩色