品牌: cobioer 公司: 南京科佰生物科技有限公司

提供商： Cobioer 服务名称： STR鉴定

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1细胞遗传质量检测的重要性很多生物医药的研究都采用培养细胞来进行,这些细胞可能是从细胞库(如美国ATCC,AmericanTypeCultureCollection)得来,也可能是受赠于其它研究人员。据估计,15-20%的时间里,实验中所使用的细胞已经不是原来的细胞系,或者与其它细胞系发生了交叉污染。显然,细胞系遭到污染、特征鉴别错误,将会极大地威胁着基于这些细胞而发表的论文的质量和研究发现的正确性。为此,很多细胞库现在都要对提交来的细胞系进行鉴定,并对细胞系之间的交叉污染进行监测。一些机构已经认识到了交叉污染的问题,如ATCC和FDA,这些机构要求对用于制药领域的实验中所使用的材料—诸如细胞系—应该进行“身份鉴定”和纯度测试。Nature杂志最近也要求报告新的人类胚胎干细胞系的文章提供STR指纹图谱数据。此外，FDA建议研究人员在培养细胞的较早阶段(细胞培养第一周)来鉴定细胞系的身份。细胞在被冻存前应再一次进行鉴定;对于活跃生长的细胞,每两个月应鉴定一次;文献发表前也应对细胞系身份进行鉴定。如果一个实验室使用不止一种细胞系,则应在实验最开始时,就要对所有的细胞系进行鉴定,以便排除交叉污染。2基于STR的方法可以轻松、快速地鉴定细胞身份细胞培养中可以使用许多方法对交叉污染进行鉴定,如同功酶分析、染色体组分型、人淋巴细胞抗原(HLA)分型和扩增片段长度多态性(AFLP)的特征分析。但是,比较好的方法是STR图谱法,在ATCC,STR分析使用的是多重PCR，可以同时扩增8个STR位点加1个性别决定位点Amelogenin。每个被分析的人源细胞系都有其独特的DNA重复模式,因此通过与基础图谱进行比对,即可对每一批新细胞系的身份进行确证。STR方法防止了ATCC将其6个“错误”细胞系进一步传播出去—因为经过STR分型后,发现原本来自女性的细胞系中存在着Y染色体特异的扩增产物。3技术流程3.1STR位点的选择为了进一步提高鉴定的分辨率，我们除了包含ATCC检测的8个STR和1个性别决定位点Amelogenin外（表1中蓝色字体），另新增了11个高度多态性位点（表1中黑色字体）。表1：STR分型位点TH01AMELTPOXD3S1358D12S391D5S818VWAD13S317D7S820D2S1338D8S1179D6S1043CSF1POD21S11D19S433D16S539FGAD18S51PENTADPENTAE

3.2实验流程实验流程简图如图1图1:实验流程图3.3实验结果3730测序仪检测结果如图2图2:测序仪检测结果图4服务流程4.1标准服务流程1)客户沟通，确认检测细胞样本以及样本数，提示实验可行性。2)建立实验方案，并在此过程中和客户保持密切沟通。3)大规模实验，有严格的指控流程保证实验结果可靠。4.2实验数据质量控制流程1)所有分型信号要求信号清晰唯一，排除不确定信号干扰。2)设有阴性对照，质控PCR污染数据。5服务优势：1)通用荧光引物，大幅降低3730实验成本。2)数据分析基于3730测序平台，结果稳定可靠。