品牌: genelb 公司: 上海晶莱生物技术有限公司

提供商： 晶莱生物 服务名称： SILAC代谢标记定量实验服务 规格： 实验

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实验技术简介：SILAC的基本原理是分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素 (重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸，细胞经5-6个倍增周期后，稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基 酸。不同标记细胞的裂解蛋白按细胞数或蛋白量等比例混合，经分离、纯化后进行质谱鉴定，根据一级质谱图中两个同位素型肽段的面积比较进行相对定量。属于体 内代谢标记法。实验操作流程：1、蛋白提取和样品制备2、标记效率测试3、样品混合4、SDS-PAGE分级5、酶解6、质谱鉴定7、软件分析8、定性定量蛋白质组结果9、生物信息学数据挖掘和统计分析实验注意事项：客户提供：1、蛋白质提取物：浓度>1μg/μl，蛋白质总量 >300μg2、细胞：通过细胞计数取不少于2×10⁶个细胞于EP管，加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂，混匀后保存于冰箱（-80℃，避免反复冻融）交付标准：1、蛋白质鉴定和SILAC定量分析结果；2、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图；3、SILAC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。其他：1、SILAC是体内标记技术，稳定同位素标记的氨基酸与天然氨基酸化学性质基本相同，所标记的细胞和未标记细胞在生物学行为上几乎没有差异，标记效率可高达100％。2、采用质谱定量，定量结果准确且批次变异小、重复性好。3、体内代谢标记与SDS-PAGE或色谱分离技术相结合，兼容疏水性蛋白和偏碱性蛋白，不受蛋白性质限制。4、多个样品混合后同时进行分离、酶切和鉴定，后续实验对样品的影响一致，减少了实验操作和仪器设备产生的影响。5、由于该技术属于体内标记，标记效果稳定，其标记效率不受裂解液的影响，不仅适合于进行全细胞蛋白的分析，还适合于膜蛋白的鉴定和定量。6、与化学标记相比，SILAC方法蛋白需要量明显减少，通常每个样品只需要几十微克的蛋白量。7、活体标记，更接近样品真实状态。8、只适用于活体培养的细胞，对于生物医学研究中常用的组织样品，体液样品等无法分析，对于动物模型的标记成本太大，无法实现。与体外标记技术相比，SILAC属于体内标记，具有以下技术优势1、高通量，可同时鉴定并定量数百至数千种蛋白质； 2、定量精确，降低由于样品制备不同而造成的实验差异； 3、线性定量范围广； 4、灵敏度更高，蛋白质需要量明显减少；5、标记采用的是体内标记技术，更接近样品真实状态。SILAC技术服务内容1、细胞同位素标记；3、SDS-PAGE分离；4、胰酶酶切后液相分离和质谱分析； 5、数据库检索及蛋白质定量分析；6、差异蛋白的生物信息学分析7、实验报告提交。实验服务报告内容1、蛋白定鉴定和SILAC定量分析结果； 2 、顾客指定蛋白质对应的质谱峰图； 3、SILAC实验完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。技术服务优势 1、灵敏度高，检测限低，可检测出低丰度蛋白； 2、分离能力强，分析范围广，iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行分离鉴定，包括高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白； 3、高通量：同时对8个样本进行分析，提高了实验通量，可同时对多个时间点或不同处理的蛋白质进行分析； 4、结果可靠：定性与定量分析结果更加可靠； 5、自动化程度高：液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。收费标准/服务周期/提供结果：欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。更多实验技术服务请浏览网站其他内容，或来电咨询！做实验，找晶莱！您的科研生涯，我们一路相伴！【平台项目开展范围】慢病毒，腺病毒，RNAi类，分子生物实验，病理实验，免疫学实验，细胞实验，动物实验，蛋白组学实验，芯片类实验，并为广大客户朋友们提供课题设计指导、基金申请指导、SCI、核心期刊等服务。全国统一咨询服务热线:4008-766-085【上海公司】上海市嘉定区槎溪路788弄1号17层【北京公司】北京市大兴区科创十四街嘉捷·BDA企业汇16号楼三层【长沙公司】长沙市高新区麓谷大道627号新长海中心B2-403室 【技术咨询】18500539084【公司邮箱】lab-china@genelb.cn【全国业务咨询】北京：18810244671 上海：15800916241 长沙：15616228964 武汉：15201856307 西安：13651049420 广州：18810244571 其他地区：13818286017【晶莱生物】已开展了数千个实验外包项目。我们专注于医学课题研究，已从课题申请、方案设计、试剂采购、模型构造、标本检测、数据分析、以及对SCI撰写与发表的支持，各个环节积累了数千个成功案例经验，为数千个来自临床的科研工作者解决了大量的科研问题。更多相关实验服务信息请咨询晶莱生物