品牌: biomedworld 公司: 沃登医学

提供商： 沃登医学 服务名称： 细胞免疫荧光

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细胞免疫荧光一、细胞免疫荧光服务介绍免疫荧光技术服务（Immunofluorescence technique）又称免疫荧光抗体染色，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是基于免疫学、生物化学和显微镜技术建立起来的一项技术。由于抗原-抗体反应具有高度的特异性，我们不仅能够看到待测样本中目的蛋白的位置，同时也能通过荧光的强度推测反应蛋白的含量。如果使用两种以上的抗体进行染色，我们可以观察到多种蛋白在组织中的分布，以及相互作用关系等。用于标记蛋白的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄（FITC），四乙基罗丹明（RB200）和四甲基异硫氰酸罗丹明（TMRITC）。 直接染色法： 将标记的特异荧光抗体直接滴加在抗原标本上，经过一定时间的染色。洗去多余的荧光抗体，在荧光显微镜下便可以观察到由于抗原抗体结合而发出的荧光。此方法操作简单，实验流程短。缺点是：一种标记抗体只能检测一种抗原，敏感性略差，使用此方法应设置阳性和阴性对照。 间接染色法： 使用此方法检测的时候，先用未标记的一抗与抗原标本进行反应，反应一段时间后洗去多余抗体，再使用标记有荧光的二抗抗体与一抗反应。如果第一步中的抗原和抗体互相反应，则会形成抗原-一抗-二抗的复合物，再洗去未反应的标记抗体，在荧光显微镜下便能够看到荧光。二、细胞免疫荧光服务内容1.已转染72h的细胞种于共聚焦专用培养皿里，预冷PBS洗三遍，每次5分钟；2.细胞半干时，覆盖以4%冷的多聚甲醛固定15分钟，避光；3.吸去多聚甲醛后，用预冷PBS洗三遍，每次5分钟；4.0.5% TritonX-100覆盖细胞10分钟，预冷PBS洗三遍，每次5分钟；5.与二抗相同宿主的血清室温封闭30分钟；6.配制一抗：SAB + FBS = 1:200；7.加入一抗覆盖细胞，锡纸包裹4℃避光过夜；8.取出细胞复温至室温约1 h；9.冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床；10.配制荧光标记二抗：用FBS配制，浓度1:200；11.加入二抗，室温孵育1小时，避光；12.冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床；13.DAPI染核，每皿1滴，完全覆盖住细胞即可；14.冰1‰Tween洗两次，每次5分钟，于摇床。冰PBS洗一次，5分钟，于摇床；15.加入防荧光淬灭封片剂封片，避光；16.上机confocol。细胞免疫荧光染色结果三、细胞免疫荧光 服务说明1. 签订实验协议；2. 客户提供：1） 客户可以提供已经制备但未做进一步处理的细胞爬片、石蜡切片、冰冻切片等；2） 客户可以提供组织样品，委托我们完成样品切片的制备；3）客户可以自行提供抗体，也可使用公司抗体库中抗体。3. 实验周期及服务费用因样品的数量而改变，具体详询本公司。四、细胞免疫荧光服务质量承诺1．返还未使用的客户提供的抗体；2．真实的实验原始数据；3．权威的检测报告；4．详细完整的实验流程。