品牌: newbornco 公司: 深圳市纽邦生物技术有限公司

货号： NK003 供应商： 纽邦 保存条件： -20℃ 规格： FOR 10 REACTIONS

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Trimmer-2 cDNA normalization kit原理： 在真核细胞中，各种mRNA以不同丰度构成了总RNA的1%。一般来说，5-10个高丰度表达基因转录在单个细胞中可达到几千个拷贝，占mRNA的20%，500-2000个中等丰度表达基因转录在单个细胞中有几百个拷贝，占mRNA的40-60%；而剩下20-40%的mRNA则是由一到几十个拷贝的低丰度转录本组成。这种基因转录水平上的巨大差异使大规模的转录分析复杂化，导致多丰度cDNA的重复测序，给文库的筛选和分析带来障碍。 cDNA的均一化降低了高拷贝基因的丰度，使在cDNA样本中的基因浓度趋于一致，因此可以大大提高测序的效率和发现极低丰度基因的能力。 利用Duplex-Specific Nuclease（DSN）进行cDNA均一化是一种可应用于全长丰富的cDNA均一化的高效方法。此方法基于核酸杂交动力学和双链DNA特异的DSN酶的独特特性。DSN是来自红金蟹的一种特异性核酸酶，具有热稳定性，在60-65℃时具有最大活力，即使在70℃高温孵育20min后仍然具有25%的活力，正是由于DSN的热稳定性，在cDNA复性条件下dsDNA降解，可以防止二级结构和sscDNA片段里的adapter sequences非特异性杂交的形成。复性过程中，高丰度基因更频繁地转变为双链的cDNA。这样，就明确地形成了两部分：高风度的cDNA部分和均一化的单链cDNA，接着双链cDNA被DSN降解；ss cDNA可经PCR放大，对PCR引物和条件进行了优化，减少对更短片段的扩增趋势。 可进行均一化的cDNA的制备应该基于总RNA或者poly（A）+RNA，并且在两端应该含有已知的adapter sequences以用于PCR扩增。对于构建全长cDNA文库来说，RNA的质量是至关重要的。在cDNA合成过程中，可用多种方法在cDNA末端引入侧翼序列，如：adapter连接和模板交换法。 利用DSN均一化已成功用于多种动物和植物模型，这种灵活的均一化方法稍加修改即可应用于多种用途。应用： DNAnormalization技术是一种新型的高效平衡化未克隆的全长富集cDNA的有效方法。Trimmer-2试剂盒是Evrogen公司独有产品，利用DNAnormalization技术，高效降低高丰度表达基因、富集低丰度表达基因，得到的cDNA包含相等浓度的不同基因，可应用于cDNA文库的构建和直接测序，以及在后续的测序平台Illumina/Solexa、ABI/ SOLiD和Roche / 454上的高通量测序。另外，这个试剂盒还与构建cDNA的ClontechSMART-based kit兼容，来用于cDNA均一化。特点：1、快速有效地降低在文库中高拷贝存在的cDNA 的丰度2、克隆文库前对全长丰富的cDNA进行均一化3、操作简单，无需物理分离步骤4、与Illumina /Solexa,，ABI / SOLiD和Roche / 454的测序实验完全相容 温馨提示：不可用于临床治疗。