品牌: biolzy 公司: 上海联硕生物科技有限公司

服务名称： 流式细胞术检测技术服务

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流式细胞术检测技术服务 作者：联硕生物1、检测项目：(1)细胞周期细胞（2）细胞凋亡(3)免疫细胞分型(4)表面抗原鉴定(5)细胞内钙离子检测(6)线粒体功能(7)细胞分选2、样本及来源：1)单个细胞：1~2×106个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。2)外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。说明：1、实验所用的流式细胞仪为COULTEREPICSXL。2、送检样本量：1)、单个细胞：1~2×106个细胞左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；来源于人、小鼠、大鼠或其它。3、用户需要进行流式细胞仪检测时须提前预约，同时说明实验目的、方法等。一次送检标本数不少于10个。如果一次送检标本总数不足10个，每个测试费用为标准收费×2。4、我公司在正式接受实验委托一周内交付实验结果。所提供实验结果忠实于样本的实际情况。5、用户须一次性全额预付实验费。6、部分常用荧光探针，如PI等，我公司可免费提供，；特殊标记物，如CD抗体等，用户须另行购买，也可委托我公司代购；用户所提供抗体应可与样本发生特异性识别反应。7、由用户提供的样品或试剂所致的实验问题由用户负责。8、请在表中说明检测具体要求（可另附页），由于填写资料不详所致任何问题由用户负责。9、请在送样的同时提供样本来源及处理方法等信息，样品检测后原则上本公司不负责保存。客户提供：（1）标本:组织、细胞、全血（抗凝）（2）抗体（荧光素标记）PE最强，适用于弱表达抗原FITC最便宜，适用于强表达抗原，适用范围广biotin-avidin不适合弱抗原的检测（3）其他试剂（如Fluo-3）（4）染色试剂盒附：流式细胞术检测样品推荐制备方法：A.直接标记抗体（FITC标记抗体）：(1)、收集1×106个细胞，800rpm离心5min，4℃以上冷PBS洗一次。(2)、用4%多聚甲醛1ml室温固定40分钟，800rpm离心5min去上清。加2mlPBS重悬洗涤细胞，800rpm离心5min。(3)、用1ml含5%人血清的PBS重悬细胞，冰上孵育10min，800rpm离心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA和饱和剂量的荧光标记抗体(5×105个细胞/20ul抗体)的PBS,避光冰上放置30min,离心弃上清。加入200ul1%多聚甲醛固定，待测即可。(4)、用流式细胞仪检测荧光值,每管计数10000个细胞。B.未标记抗体间接免疫荧光标记法：(1)、收集2×106个细胞，用冷的PBS2ml洗涤细胞一次，800rpm离心5min。(2)、用2ml4%多聚甲醛室温固定细胞40min,800rpm离心5min；2mlPBS重悬细胞，800rpm离心5min；(3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重悬细胞，冰上放置10min,800rpm离心5min。(4)、加入饱和剂量未标记抗体，冰上放置40min,800rpm离心5min，用2ml冷的PBS重悬细胞，800rpm离心5min，洗去未结合一抗，重复一次。(5)、加入荧光标记（FITC）标记的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm离心5min，去上清，PBS洗涤两次。(6)、加入0.5ml1%多聚甲醛重悬细胞；固定待测。(7)、流式细胞仪检测荧光值,每管计数10000个细胞。C.细胞周期、细胞凋亡及DNA倍体分析样品（PI染色）的制备：(1)、待测样本制成单细胞悬液，然后2000转/分离心5分钟，弃上清。(2)、用4℃预冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小时。(3)、调整细胞浓度为106细胞/毫升，取1毫升细胞悬液，用PBS洗三次，细胞重悬于1毫升PI染液中，37℃孵育30分钟即可进行流式分析。(4)、PI染液终浓度为50微克/毫升，RNaseA终浓度为20微克/毫升。注：本方法仅供参考，如有其它要求，请在送样前说明。

服务项目样品外理应用的试剂收费细胞周期细胞细胞——胰酶消化——PBS洗——70%乙醇4℃固定过夜（不超过一周）RNA酶，PI染料<10个样品，80元/个>10个样品，60元/个试剂费已包括。细胞凋亡新鲜培养的细胞AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒<10个样品，150元/样品>10个样品，120元/样品已包括试剂费用，客户提供试剂可减20元另需细胞培养费用。免疫细胞分型培养的细胞：如白血病细胞，客户刺激好的细胞、抗凝全血、脾匀浆破膜剂，固定剂，刺激剂、特异性抗体（需客户提供）双染：<10个样品，120元/样品>10个样品，100元/样品三染：在原来基础上加30元需要分离细胞、培养、刺激的具体情况另记表面抗原鉴定培养的细胞特异性抗体（需客户提供）单染：<10个样品，80元/样品>10个样品，60元/样品双染：在原来基础上加30元三染：在原来基础上加30元细胞内钙离子检测培养的细胞Fluo-3AM(钙离子荧光探针)<10个样品，100元/样>10个样品，80元/样品（已包含试剂）线粒体功能仅适用于悬浮或贴壁培养的新鲜细胞客户提供试剂盒检测费可同细胞周期细胞分选收费：标记费用+分选仪使用费用价格体系类似于共聚焦