Bio-Rad 1mm 电击杯感受态细胞操作方法 | 授权代理

2023-07-26

Bio-Rad 1mm 电击杯感受态细胞操作方法

1. 将1 mm 电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟,待其沥干水分,正置5分钟,待乙醇挥发干净立即插入冰中,压实冰面,电极杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖,冰中静置5分钟充分降温。

2. 取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5 分钟,待其融化,加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀,避免产生气泡,立即插入冰中。

3. 用200 μl枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA混合物快速移到电击杯中,避免产生气泡,盖上杯盖。

4. 启动电转仪,设置参数:C=25 μF,PC=200 Ω,V=1.8 kV (此为BioRad 电转仪推荐参数,也可按所用电转仪推荐的参数操作),将电击杯快速放入电转槽中,电击完成快速插入冰中。

5. 2分钟后从冰中取出电击杯,放室温,加入不含抗生素的无菌培养基(室温),吹吸电击杯底部数次混匀后,转移到无菌的离心管中,根据不同菌种的复苏条件进行复苏及后续实验。

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