FDA试剂货号：F209 Fluorescein diacetate Fluorescein diacetate 商品信息 储存条件：0-5度保存，避光 运输条件：室温 分子式：

C₂₄H₁₆O₇

分子量：

416.38

特点：

● 激发和发射波长分别为488 nm和530 nm

● 可用于流式细胞仪

选择规格： 1mg

规格

特性：该产物为白色结晶粉末或固体，可溶于二甲基亚砜。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

FDA可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较BCECF或Calcein的亲水性低，因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488 nm和530 nm。

荧光特性

荧光特性：λex=488 nm, λem=530 nm

参考文献

1) B. Rotman and B. W. Papermaster, “Membrane Properties of Living Mammalian Cells as Studied by Enzymatic Hydrolysis of Fluorogenic Esters”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1966, 55, 134.

2) H. R. Hulett, W. A. Bonner, J. Barrett and L. A. Herzenberg, “Cell Sorting: Automated Separation of Mammalian Cells as a Function of Intercellular Fluorescence”, Science, 1969, 166, 747.

3) K. H. Jones and J. A. Senft, “An Improved Method to Determine Cell Viability by Simultaneous Staining with Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide”,J.Histochem.Cytochem., 1985, 33, 77.

4) K. McGinnes, G. Chapman, R. Marks and R. Penny, “A Fluorescence NK Assay Using Flow Cytometry”, J. Immunol. Methods, 1986, 86, 7.

5) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model”, Cancer Res., 1989, 49, 3783.

6) E. Prosperi, “Intracellular Turnover of Fluorescein Diacetate. Influence of Membrane Ionic Gradients on Fluorescein Efflux”, Histochem.J., 1990, 22, 227.

常见问题Q&A

Q1:如何使用FDA。

A1:下面给出一个例子。请根据细胞的种类，观察条件讨论细胞的固定和试剂浓度。 【例1】HeLa细胞的形态观察 将1mg的FDA溶解在2ml的DMSO中(储存溶液) 用PBS(-)溶液稀释，设为2μmol/L。(用5mlPBS(-)稀释8μl贮存溶液) 1)用胰蛋白酶-EDTA等回收HaLa细胞，制备细胞悬浊液。 2)离心分离细胞悬浊液(1000rpm,3min) 3)除去上清，添加PBS(-)(此时细胞数为105~106cells/mL) 4)通过粘贴等充分分散。 *因为培养液中的血清等有使背景上升的危险重复②~④的操作充分清洗。 5)在1.5mL微管中添加用4)得到的30μL细胞悬浊液。 6)在此加入15μL的FDA溶液。 7)盖上微管，37℃下孵育15min。 8)在玻璃罩上放上7)的溶液10μL，从上面再盖上一层玻璃，夹入染色的细胞悬浊液。 9)将盖杯置于荧光显微镜下，用490nm滤光器激发，观察发出黄绿色荧光的活细胞。 例2:C57BL/6小鼠脾脏细胞的双重染色，使用FDA和PI。 k.h.jones,j.a.senft,J.Histochem.Cytochem.，33,77(1985). 将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液) 将上述0.04mL溶液稀释为10mlPBS(-)。 PI将1mg溶解在50mlPBS(-)中。 在0.2mLD-PBS溶液中混浊的细胞(2×106cells/mL)溶液中添加0.1mL的FDA溶液和0.03mL的PI溶液。 孵化后观察。 【例3】使用HeLa细胞的细胞膜离子梯度对Fluorescein溶出的影响 ·E.Prosperi,Histochem.J.，22,227(1990). 将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液) 用PBS(-)，终浓度2.4μmol/L染色。

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：