Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI 商品信息 储存条件：-20度保存，避光 运输条件：室温 分子式：

C₁₆H₁₇Cl₂N₅

分子量：

350.25

特点：

● 可用于流式细胞仪

● 活细胞核染色试剂

● 激发和发射波长分别为488 nm和530 nm

选择规格： 1 mg 细胞染色

规格

特性：该产物为黄色至微黄色的绿棕色粉末或固体，可溶于水和稀盐酸。

水溶性：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

荧光染料DAPI是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对细胞核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360 nm和460 nm。

荧光特性

λex=360 nm, λem=460 nm

操作说明

产品使用步骤

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMDAPI溶液。^a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的DAPI溶液。^b）

3.将细胞在37℃下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.使用带有360 nm激发光和460 nm发射滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a）由于DAPI可能致癌，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的DAPI缓冲溶液代替培养基。

注意事项

制备DAPI储备溶液时要用水（难溶于PBS）。

但是，那些溶解在水中的物质不适合长期储存。

考虑长期存储时，请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案（代码：D523），以提高解决方案的稳定性。

文献

1) W.Schnedl,A.V.Mikelsaar,M.Breitenbach and O.Dann,”DIPI and DAPI: Fluorescence Banding with Only Negligible Fading”,Hum. Genet.,1977,36,167.

2) I.W.Taylor and B.K.Milthorpe,”An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”,J.Histochem. Cytochem.,1980,28(11), 1224.

3) F.Otto and K.G.Tsou,”A Comparative Study of DAPI,DIPI,and Hoechst 33258 and 33342 as Chromosomal DNA Stains”,Stain Technol.,1985,60, 7.

4) N.Poulin, A.Harrison and B.Palcic,”Quantitative Precision of an Automated Image Cytometric System for the Measurement of DNA Content and Distribution in Cells Labeled with Fluorescent Nucleic Acid Stains”,Cytometry,1994,16,227.

5)M.Kawai,N.Yamaguchi and M.Nasu,”Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacturing Process”,J.Appl. Microbiol.,1999,86(3),496.

常见问题Q&A

Q1核染色中所用染料的特征和区别是什么？

A1:这里引入的染料具有通过与核酸相互作用而发出荧光或增加荧光强度的特性。 除荧光波长以外的差异如下。 [EB] 它没有碱基特异性，可与所有DNA和RNA结合。 它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。 [PI] 像EB一样，它没有基础特异性。它是一种更广泛使用的染料，因为插入时它的荧光强度比EB高。 它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。 [DAPI] 与双链小槽结合。它与腺嘌呤-胸苷簇具有高度结合。 它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。 [AO] 通过利用插入双链时和与单链磷酸结合时荧光波长不同的事实，可以在双链和单链之间进行区分。 它渗透到活细胞的细胞膜上。 [Hoechst33342，33258] 它与DNA的腺嘌呤胸苷部分特异性结合。 它是一种颜料，可以渗透到活细胞的细胞膜上并染色活细胞的DNA。

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Q3如何使用DAPI进行核染色？

A3:有以下使用情况报告示例。制备DAPI储备溶液时要用水（难溶于PBS）。 但是，那些溶解在水中的物质不适合长期储存。 对于长期存储，请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案（货号：D523），具有更高的解决方案稳定性。使用时，用缓冲液或有机溶剂将储备溶液稀释至所需浓度。 [使用DAPI进行细胞染色的示例] 包含实体瘤或簇的样品的DAPI染色示例（参考文献3） 1）用0.02％胰蛋白酶-EDTA处理，在37°C下孵育30分钟，以1,500 rpm离心5分钟，然后冲洗上清液。 2）在-20°C下用50％甲醇（也可以使用乙醇）固定后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。 3）在-20℃下用30％甲醇洗涤后，以1,500rpm离心5分钟以除去上清液。 4）用0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。 5）每106个细胞添加0.2 mL的RNase的0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）（pH 7.2）（1 mg / mL），并在37°C下孵育30分钟。 6）用0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。 7）加入10 mL 1μg/ mL DAPI溶液，并在黑暗中于4°C染色2小时。 [使用DAPI进行细胞染色的例子]Vollenweider等人在磷酸化因子激活的杀伤（LAK）细胞的细胞增殖试验中。 使用荧光打印机执行DAPI染色并进行测量（参考2）。 那时，请使用0.1 mg / mL的水溶液和1μg/ mL的甲醇溶液。 使用每孔100μL进行荧光染色。