-Cellstain- Hoechst 33258 solution细胞核染色试剂货号：H341 2′-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride CAS号：23491-45-4 商品信息 储存条件：0-5度保存，避光 运输条件：室温 分子式：

C₂₅H₂₇Cl₃N₆O

分子量：

533.88

特点：

● 可用于活/死细胞DNA检测

● 蓝色荧光，毒性低

● 试剂盒稳定性高。

选择规格： 1ml

规格

特性：该产品为黄色液体。

内容：试验成功

产品概述

荧光染料Hoechst 33258是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258,常用于细胞凋亡检测。

Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。

Hoechst染料可透过细胞膜并对DNA染色而发出强烈的蓝色荧光。它们在聚AT序列的富集区域的小沟处与DNA结合。Hoechst 33258和Hoechst 33342均可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechst-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。

荧光特性

λex=350nm, λem=461nm

原理

操作说明

染色步骤

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMHoechst染料溶液。^a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的Hoechst染料溶液。^b）

3.将细胞在37ºC下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.在带有350 nm激发和460 nm发射滤光片的荧光显微镜下观察细胞。

a）由于赫斯特染料可能具有致癌性，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲溶液代替培养基。

文献

1)M. J.Lydon,K. D.Keeler andD. B.Thomas, “Vital DNA Staining and Cell Sorting by Flow Microfluorometry”,J. Cell Physiol.,1980,102(2), 175.

2)M.Sriram, van derG. A.Marel,H. L.Roelen, vanJ. H.Boo andA. H.Wang, “Structural Consequences of a Carcinogenic Alkylation Lesion on DNA: Effect of O6-ethylguanine on the Molecular Structure of the d(CGC[e6G]AATTCGCG)-netropsin Complex”,Biochemistry,1992,31(47), 11823.

3) T. Ohara and T. Tsuge, “FoSTUA, Encoding a Basic Helix-Loop-Helix Protein, Differentially Regulates Development of Three Kinds of Asexual Spores, Macroconidia, Microconidia, and Chlamydospores, in the Fungal Plant PathogenFusarium oxysporum”,Eukaryot. Cell,2004,3, 1412.

常见问题Q&A

Q1:如何使用Hoechst 33258。

A1：有多种使用方法，但以形态观察为例。 它用作观察凋亡细胞中核变化（染色质浓缩，断裂）的简便方法。 <试剂> ・细胞固定液：1％戊二醛/ PBS（-） ・荧光染色：1 mM Hoechst33258 / PBS（-） •Dojindo的产物为[1 mg / mL]（约1.87 mmol / L） <操作方法> 1.将含有约1 x 106个细胞的细胞培养基以400Xg离心5分钟，并弃去上清液。 2.加入100μL细胞固定溶液，并通过移液或类似方法混合。 3.在室温下静置30分钟。 4.离心400Xg，5分钟，弃去上清液。 加入1 mL PBS（-），用移液器等混合，以400Xg离心5分钟，弃去上清液。 （*此时，戊二醛经常被洗涤和去除。可能会导致变色） 5.添加20μLPBS（-）并混合，然后添加4μL荧光染料并混合。 6.将1滴（5）的细胞溶液滴在载玻片上，盖上玻璃盖，然后按边缘。 7.在荧光显微镜下观察。 *由田沼靖（YasushiTanuma）指导的细胞工程独立体积实验规程系列“细胞凋亡实验规程”

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。

A2：

Q3：Hoechst 33258和Hoechst 33342解决方案的激发波长和发射波长及其区别。

A3:波长如下。 Hoechst33342 Ex：350 nmEm：461 nm Hoechst33258 Ex：352 nmEm：461 nm 两者的基本用法是相同的。 我们的产品是水溶液，所以稀释至所需浓度并添加。 两者之间的区别在于，它基本上是一种特异性结合腺嘌呤-胸苷部分的药物。 它也穿过活细胞的膜并与活细胞的DNA结合。 Hoechst 33342的膜渗透性略高。 Hoechst 33258似乎是dsDNA的选择性抗体。