天恩泽可调式易错PCR试剂盒 160903-100，产品简介：
产品品牌：天恩泽
产品名称：可调式易错PCR试剂盒
英文名称：Controlled Error-prone PCR Kit
产品货号：160903-100
产品规格：100次
产品价格：1900元

天恩泽可调式易错PCR试剂盒 160903-100

我们上海金山科研平台公司作为天恩泽公司的代理商，先简单介绍一下天恩泽公司：

北京天恩泽公司的目标是研发出技术先进、质量稳定、价格合理的试剂精品。公司的创立宗旨是技术至上、质量至上、服务至上，公司的产品研发团队均为高学历并在海外有长期的科研经验；公司的管理团队已在行业内拥有超过20年管理经验；同样，公司的运营团队也有丰富的执行经验。

北京天恩泽公司充分了解客户的需求，并努力创新以满足客户不断发展的需求。我们将与我们的客户共同成长，成为生物技术领域中zhuoyue产品和服务的jijia提供者。

DNAout、RNAout、Erasol、天净沙、克必隆、归去来、好亦多均为天恩泽基因注册商标(试剂类)。

天恩泽可调式易错PCR试剂盒 160903-100，产品简介：

产品品牌：天恩泽

产品名称：可调式易错PCR试剂盒

英文名称：Controlled Error-prone PCR Kit

产品货号：160903-100

产品规格：100次

产品价格：1900元

运输：低温

保存：-20℃保存

有效期：1年

货期：1-2天

产品介绍：

可调节突变率

天恩泽可调式易错PCR试剂盒 160903-100，产品特点：

易错PCR（error-prone PCR）是利用Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校对功能的特性，

在一定条件下（如不同的 dNTP 浓度、Mg 浓度和 MnCl2存在）能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错 PCR 和常规PCR的比较如下：

本产品是在本公司的易错 PCR试剂盒基础上改进而得，本产品具有下列特点：

1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。

2. 配方经过精心优化，实验人员在一定范围内可以控制突变率，一轮 PCR 的突变率范围在2-8突变/1000bp，更高的突变率可以通过多轮PCR达到。

3. 可用于连续易错 PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。

4. 可以扩增的 DNApian段更长，达到2kb，对于2kb 以上的产物，建议分段扩增。

5. 本试剂盒足够100 次30uL 体系的易错PCR。

本产品是在本公司的易错 PCR试剂盒基础上改进而得，本产品具有下列特点：

1. 即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。

2. 配方经过精心优化，实验人员在一定范围内可以控制突变率，一轮 PCR 的突变率范围在2-8突变/1000bp，更高的突变率可以通过多轮PCR达到。

3. 可用于连续易错 PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易错 PCR 的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。

4. 可以扩增的 DNApian段更长，达到2kb，对于2kb 以上的产物，建议分段扩增。

5. 本试剂盒足够100 次30uL 体系的易错PCR。

规格及成分

成 份	编 号	十孔盒包装
易错PCR Taq DNA 聚合酶（5U/uL）	101005c	50 uL（红色盖）
易错PCR Mix 2.0，10×	160903a	300 uL（黄色盖）
易错 PCRdNTP 2.0，10×	160903b	300 uL（白色盖）
易错PCRMnCl2	160903c	300 uL（紫色盖）
易错PCRdGTP	160903d	300 uL（蓝色盖）
超纯水	100935	1 mL（本色盖）
使用手册	160903sc	1 份

运输及保存：低温运输，-20℃保存, 有效期为一年。

自备试剂：引物、DNA模板、常规 PCR 试剂盒。

使用方法：

1. 将引物稀释到10uM。引物也是决定易错 PCR 成败的关键因素，设计引物时要保证其Tm 在 70℃，长度在 25-30nt 之间，GC 含量在45%-60%之间，3 端 GC 含量低，并且没有发夹结构。

2. 用自备易错 PCR 引物和常规 PCR 试剂扩增制备易错 DNA 模板（常规 PCR 产物），胶回收并准确确定浓度。注意：易错 PCR 的模板一定要用胶回收的常规 PCR 产物，因为胶回收会可以把电泳不可见的非特异性扩增片段去除，否则这些片段由于也是用易错 PCR 引物扩增所得，在易错 PCR扩增时也会被扩增，产生竞争抑制，降低靶分子的扩增效率。如果常规PCR制备模板的引物和易错 PCR 引物不同（类似巢式 PCR）则可以避免此问题，但需要合成两对引物。

3. 将回收的 DNApian段（模板）稀释到1ng/uL 、10ng/uL 和100ng/uL三个浓度。注意：模板使用量是影响突变率的重要因素，模板 DNA 为非突变 DNA，扩增产生的 DNA 为突变 DNA，易错PCR体系终 DNA 量是基本固定的，因此模板 DNA 使用量越大，则突变 DNA在终产物中的相对比例就越低，突变率就越低。反之亦然。但模板太少又不容易扩增成功，所以建议同时测试两个模板用量。如果都成功，则优先选用模板浓度低的 PCR 产物进行分析。

4. 根据每1000bp的预期突变数按下表确定30uL易错PCR体系中MnCl2和dGTP的用量（这是在模板DNA不超过1ng的前提下的数据）。表中的Mn表示易错PCR的MnCl2, dG表示易错 PCR的dGTP：

预期突变数	2 个	3 个	4 个	5 个	6 个	7 个	8 个
Mn 用量（uL）	0	1.0	2.5	4.0	4.0	4.0	4.0
dG用量（uL）	0	0	0	1.0	2.0	3.0	4.0

5. shouci次建议设置 3 个模板浓度。在 3 干净的 PCR 管中，分别加入下列成分（这里是设置30uL 的反应体系，如果反应体系不是30 uL，则各成分用量需要按等比例增加或减少） ：

成分	模板用量1	模板用量2	模板用量3
易错PCR Mix, 10×	3 uL	3 uL	3 uL
易错PCRdNTP, 10×	3 uL	3 uL	3 uL
易错PCRMnCl2	根据上步计算	根据上步计算	根据上步计算
易错PCRdGTP	根据上步计算	根据上步计算	根据上步计算
自备 DNA 模板	1 uL（1ng/uL）	1 uL（10ng/uL）	1 uL（100ng/uL）
自备 PCR引物 (10 uM each)	1 uL each	1 uL each	1 uL each
易错PCR Taq DNA 聚合酶	0.5 uL	0.5 uL	0.5 uL
超纯水	补水到 30uL	补水到 30uL	补水到 30uL

6. 按已经优化的常规 PCR条件进行易错 PCR：

PCR前变性	94℃ 3 分钟
易错PCR(循环 30-60 次)	94℃ 1 分钟
	45℃ 1 分钟
	72℃ 1 分钟（对1Kb 长的模板）

注：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理。长度每增加 1Kb，时间延长1 分钟。易错 PCR 循环次数越多，突变DNA（扩增产物）与非突变 DNA（模板）的比例就越高。此外在突变率和模板长度恒定的情况下，扩增次数越多，发生突变的数就越高，在同一模板上发生的突变位点数就越多，所以shouci次实验时keyi做 30、35、40、45、50、55、60 次7 个循环数的比较。

7. 电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。如果没有，可以调整模板用量和 PCR 参数。

8. 胶回收易错 PCR 扩增产物、克隆并对单菌落进行功能筛选或测序分析、如果需要增加突变率，可以以突变后的 DNA 为模板，进行下一轮易错 PCR。

疑难解答

Q：现象：没有 PCR产物。

A：可能原因：一是引物没有优化，可以重新设计引物；二是模板 DNA 太少，可以增加用量；三是模板不纯，keyi先胶回收；四是 DNA 溶液中有 EDTA，可以适当补加Mg++。

Q：现象：太多的 PCR 条带或PCR条带模糊一片。

A：可能原因：一是模板有胶回收、二是 PCR 循环数太多；三是复性温度太低；四是引物没有优化；五是 PCR 条件没优化，可以使用 touch-down PCR。

Q: 如果需要更高的突变率，如何办？

A: 可以使用连续多次易错 PCR 来提高突变率。但先用胶纯化回收易错 PCR片段,再用于下一轮易错 PCR。此外不能用少于千分之一的shouci次易错PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错 PCR keyi使用所有第二轮的易错 PCR 产物作为模板，但需要在10mL 体系中完成（可以分成很多100uL 体系进行）。

关联产品：易错PCR试剂盒（CAT#:101005-100）

以下是天恩泽品牌部分热销产品，如需其他品牌产品请咨询本店客服：

品牌	产品货号	货品名称	规格
天恩泽	200101-50	第二代病毒采运试剂盒（低敏型）原拭子病毒采运试剂盒，核酸诊断用	50次/盒
天恩泽	200201-50	第三代免提核酸提取病毒采运试剂盒	50次/盒
天恩泽	200601-50	荧光及可视化LAMP试剂盒	50次/盒
天恩泽	200603-50	荧光及可视化RT-LAMP试剂盒	50次/盒
天恩泽	200108-2.5L	xinguan病毒灭活液A型	2.5L/瓶
天恩泽	91103-250	非冻型拭子病毒保存液	250ml/瓶
天恩泽	15-81920	SARS-CoV-2冠状病毒N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒	50次/盒
天恩泽	16-81920	SARS-CoV-2冠状病毒N基因荧光及可视化RT-LAMP试剂盒	50次/盒
天恩泽	15-23000	African Swine Fever Virus(ASFV)非洲猪瘟病毒探针法荧光定量PCR试剂盒	50次/盒
天恩泽	16-23000	African Swine Fever Virus(ASFV)非洲猪瘟病毒LAMP试剂盒	50次/盒
天恩泽	15-29420	Yersinia pestis鼠疫耶尔森菌(鼠疫杆菌)探针法荧光定量PCR试剂盒	50次/盒
天恩泽	71201-50	柱式动物RNA提取试剂盒	50次/套
天恩泽	71001-50	柱式病毒RNA提取试剂盒	50次/套
天恩泽	60705-50	一管式植物DNA提取试剂盒	50次/套
天恩泽	3070-100	动物RNA提取试剂盒（TRIzol）	100mL/瓶
天恩泽	81027-50	TRIzol伴侣	50次/套
天恩泽	70701-50	柱式病毒DNA提取试剂盒	50次/套
天恩泽	3674-50	一管式病毒DNA提取试剂盒	50次/套
天恩泽	90404-50	柱式植物RNA提取试剂盒2.0	50次/套
天恩泽	60802-50	柱式细菌DNA提取试剂盒	50次/盒
天恩泽	71203-50	柱式植物RNA提取试剂盒	50次/套
天恩泽	60602-50	柱式植物DNA提取试剂盒	50次/套
天恩泽	90315-250	非冻型尿液DNA保存液	250mL/瓶
天恩泽	3660-250	非冻型组织DNA保存液	250mL/瓶
天恩泽	3060-250	非冻型组织RNA保存液	250m/瓶
天恩泽	90805-10	即用型PCR试剂盒3.0	1ml×10/盒
天恩泽	90708-1.5	即用型高保真PCR试剂盒	1.5mL/瓶
天恩泽	90408-1	2X 染料法荧光定量PCR Mix(2x SYBR qPCR Mix）	1ml/管
天恩泽	190303-1	2X 探针法qPCR Mix （TaqMan探针法荧光定量PCR试剂盒）	1ml/管
天恩泽	101005-100	即用型易错PCR试剂盒	100次/套
天恩泽	160903-100	可调式易错PCR试剂盒	100次/套
天恩泽	3090-250	天净沙RNase清除剂A型（原固相RNase清除剂）	250mL/瓶
天恩泽	3091-1.5	天净沙RNase清除剂B型（原液相RNase清除剂）	1.5mL/套
天恩泽	140648-250	PCR污染清除剂	250 mL/瓶
天恩泽	70902-1.5	PCR级甜菜碱溶液，5M	1.5mL/管
天恩泽	100805B-250	Tris饱和酚-lvfang-yiwuchun混合液（DNA提取用）	250ml/瓶
天恩泽	130502-50	无内毒素水	50mL/瓶
天恩泽	160251-250	4%中性甲醛固定液	250mL/瓶
天恩泽	100302-100	包涵体蛋白溶解及复性套装	100次/次
天恩泽	200604	核酸释放剂(DNA-RNA通用型)	300次/盒
天恩泽	61202-10	天净沙核酸释放剂	10mL/瓶
天恩泽	70303-1.5	绿如蓝核酸染料（UV）	1.5mL/管
天恩泽	70503	DNA电泳分子量标准系列	50次/管
天恩泽	小师弟	高压快速电泳预制胶	10块/盒