通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)-PCR试剂/耗材-分子生物学
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| 别名 | 通用RT-PCR试剂盒(M-MLV) 反转录试剂盒 |
|---|---|
| 英文名称 | Universal RT-PCR Kit(M-MLV) |
| 储存条件 | -20℃ |
| 单位 | 盒 |
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物。同时，在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中，还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配制的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的M-MLV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)产品简介
莫洛尼鼠白血病病毒反转录酶（M-MLV RT）是一种RNA依赖的DNA聚合酶，能使mRNA（>5kb）转录为cDNA。M-MLV RT的RNase H活性相对于禽成髓细胞瘤病毒反转录酶较弱，更适合用来反转录较长的mRNA。M-MLV RT应用于以RNA为模板合成cDNA的第一条链。
注意：M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反转录酶，因此要得到和用AMV 反转录酶一样产量的cDNA需加入更多单位的M-MLV反转录酶。
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)使用方法
1）使用方法简介以用2mg总RNA为例。在无RNase离心管中，加入0.5mg引物至含总RNA的样品中，总体积不大于15ml。70℃，5分钟打开模板链形成的二级结构。立即放于冰上降温防止二级结构恢复，随后短暂离心使液体集中在离心管底。
2）加入以下成分到已退火后的引物–模板混合物中。
注意：不要改变引物的加入比率。
M-MLV 5×Reaction Buffer 5ml
dATP，10mM 1.25ml
dCTP，10mM 1.25ml
dGTP，10mM 1.25ml
dTTP，10mM 1.25ml
Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor 25 units
M-MLV RT 200 units
无核酸水至最后体积 25ml
3）轻轻混匀离心管，如果使用随机引物在37℃孵育60分钟，其他引物则42℃孵育。延伸温度在37～42℃之间最佳。
4）M-MLV RT 用于合成cDNA的第一链。往后的合成则需要根据需要自行设计引物再次合成。
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)Buffer组成
M-MLV RT 5×Reaction Buffer
250mM Tris-HCl（PH 8.3 室温下）
375mM KCl
15mM MgCl2
50mM DTT
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)来源
大肠杆菌表达纯化
通用RT-PCR试剂盒(M-MLV)保存条件
-20℃保存。避免经常冻融。
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