Applied Biosystems 7500 Fast实时荧光定量PCR仪配置和IQ/OQ服务方案-

2023-04-02

主要功能用途

7500 Fast实时荧光定量PCR仪具有5色荧光检测通道和96孔快速升降温模块。支持常规单重(Singleplex qPCR)、多重荧光定量分析(Multiplexing qPCR)和快速PCR检测。

主要应用包括:

1、基因表达分析

动植物和微生物在生理病理、环境及外来胁迫下相关基因表达的变化分析以及SiRNA诱导基因沉默和基因敲除后特定基因表达水平的检测。

2、miRNA表达水平的检测

基于miRNA与特定靶基因mRNA表达水平变化间的关联,研究miRNA 调控基因表达机制。

3、基因分型(SNP genotyping)

利用TaqMan探针、饱和DNA染料HRM曲线分析进行基因分型,得出等位基因频率、基因型占总基因型比率等。可应用于如遗传病诊断,SNP基因分型,药物代谢酶DME基因分型,法医遗传学鉴定等。

4、拷贝数变异(CNV)

拷贝数变异(Copy number variation, CNV)是指因基因组发生重排而导致长度1KB以上的基因片段的缺失(减少)、插入、重复(增加)、重排、倒 位、DNA 拷贝数目变化,也称为拷贝数多态性(copy number polymorphisms, CNPs)。是造成物种个体差异和人类许多疾病(如癌症、遗传性疾病、心血管疾病)的一种重要遗传基础。荧光实时定量PCR检测初始样品的某个DNA 片段的拷贝数进行定量,用已知拷贝数为2的DNA内参校正而实现对目DNA 片段拷贝数的确认。

5、高分辨率溶解曲线分析(High resolution melt, HRM)

DNA序列长度、GC 含量及碱基互补性差异影响DNA双链结构的热稳定性。高分辨熔解曲线(high-resolution melt,HRM) 分析是通过实时监测升温过程中与双链DNA特异性结合的荧光染料释放的绿色荧光强度的变化,了解PCR 产物中DNA分子的解链温度情况,分析样品特定基因片段DNA组成变化。实时荧光定量PCR实验运行程序中引入溶解曲线分析环节后,可借助于专用HRM分析模块完成HRM分析。HRM用于突变扫描和基因分型,不受突变碱基位点和种类限制,既可对未知突变进行筛查、扫描,又能对已知突变进行分析,还可用于STR分析。

6、病原体检测(Pathogen detection)

实时荧光定量PCR仪能可靠用于临床医学人体上呼吸道的感染、肺炎、消化道感染、中枢神经系统等疾病,以及畜牧业、农作物病虫害的病原体的检测确认、感染严重程度的量化评估。

7、蛋白热稳定性分析(Protein thermal shift)

利用实时定量PCR仪来分析热稳定性,进行配体-蛋白结合的高通量筛选,突变或修饰对蛋白热稳定性的影响

使用蛋白结合染料(如Protein Thermal Shift 染料),实时定量PCR系统上运行实时熔解实验,根据因蛋白熔解导致荧光图像差异,分析配体与蛋白的结合稳定性。可用于以高通量筛选配体与蛋白的结合, 筛选能与蛋白靶点结合的小分子和片段文库候选药物、抗体,鉴定最佳缓冲液条件以改善蛋白的纯化和分离等。

8、食品安全和GMO(genetically modified organism)检测

实时荧光定量PCR技术用于食品的微生物污染监测、肉食类食品食材来源和组成的检验、如转基因动植物基因的检测等。

9、耐药基因检测

性能特点

7500 Fast实时荧光定量PCR仪采用的快速加热块,可在极速运行时保证热均一性。快速变温循环方式,可在短短30分钟内得到高质量实验结果;

1、5色荧光检测通道完美支持多重实时定量分析

7500 Fast系统配置有荧光激发滤片、检测滤片优化固定组合的5个荧光检测通道,经出厂校准的染料包括:FAM/SYBR Green I、VIC/JOE、NED/ TAMRA/Cy3、ROX/Texas Red 和 Cy5 染料,能够在单个反应孔中同时进行多个靶标的同步检测。

2、支持快速反应检测

7500 Fast实时荧光定量PCR仪使用独特设计的热循环模块,可在极速运行时保证反应模块温度的均一性。

配合TaqMan Fast Universal PCR Master Mix和Fast SYBGreen Master Mix预混液和快速光学反应板,在不影响扩增延伸阶段时间和实验扩增效能情况下,快速变温速率完成规定实验程序。快速光学反应板可确保在 10–30 uL 反应体积下获得与标准常量实时荧光定量PCR反应一致的检测精度,而更快速得到实验结果。

快速热循环技术,最短可在30分钟内完成一次运行。

3、高分辨率熔解曲线分析。

Applied Biosystems熔解曲线分析软件(High Resolution Melting Analysis,HRM)软件,易于使用,可通过HRM分析实现更精确的突变筛查和基因分型分析。

4、21 CFR Part 11合规管理功能

21 CFR Part 11合规管理软件,内含安全、审计、电子签名套件,实现运行和数据的合规,可满足实验管理符合美国联邦法规第21章第11节 (21 CFR Part 11)的规定。

5、AB提供IQ/OQ/IPV验证支持解决方案

经验证的AB工程师可帮助执行Installation Qualification(IQ)/Operational Qualification(OQ)和Iinstrument Performance Verification(IPV)流程操作。

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