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鲎试剂( Tachypleus Amebocyte Lysate , TAL )是海洋节肢动物鲎血液中的阿米巴细胞( Amebocyte )经裂解液或机械方法裂解细胞后提取得到的一种细胞溶解物。鲎试剂中含有特异性的凝固酶,在一定条件下可被极微量的内毒素激活,当凝固蛋白原的精氨酸18-苏氨酸19和精氨酸46-甘氨酸47之间的肽键被切断后,则游离出含有28个氨基酸的C肽片段和凝固蛋白分子两端的A肽和B肽片段,并通过二硫键联结聚合成凝胶,其形成凝胶的速度和坚固程度与鲎试剂中凝固酶含量及内毒素浓度成正比。根据鲎试剂的这一特殊性质,可以方便、敏感地快速定性或定量检测检品中的内毒素含量。

鲎阿米巴细胞溶解物

若干ml

20mmol/L氯化钙溶液

若干ml

154mmol/L氯化钠溶液

若干ml

  1. 采血:新鲜健康成年的中国鲎(Tachypleus tri-denatus Leach),头胸-腹关节处以碘酒、酒精(70%)常规消毒,用16号兽用针头或特制玻管行心脏穿刺,使鲎血流入盛有抗凝剂(20mmol/L茶碱或25mmol/L乙二胺四乙酸钠, ED-TA比例为1:1(v/v)的无热原收集瓶中;

  2. 离心和洗涤:采血后立即离心,600g,5分钟,弃蓝色上清，见白色粉末状沉淀,加3.1%NaCI洗涤、离心两次,600g,5分钟,再次洗涤后进行细胞计数;

  3. 裂解:将5×104/mm3细胞悬液100ml沉淀后,其压积细胞加入10ml裂解液(154mmol/L NaCl ,50mmol/L Tris-HCI pH7.1±0.3,10~100mmol/L CaCl2),用力振荡后置4℃冰箱见24~72小时,取出2000g离心,15分钟,所得上清即为粗制鲎试剂;

  4. 精制:氯仿抽提后加20mmol/L氯化钙和154mmol/L氯化钠盐析,作敏感度检测后分装冻干保存。