天恩泽 荧光及可视化RT-LAMP扩增试剂盒 200603-50，产品简介：
产品品牌：天恩泽
产品名称; 荧光及可视化RT-LAMP扩增试剂盒
产品货号：200603-50
产品规格：50次
产品价格：1590元

天恩泽 荧光及可视化RT-LAMP扩增试剂盒 200603-50

我们上海金山科研平台公司作为天恩泽公司的代理商，先简单介绍一下天恩泽公司：

北京天恩泽公司的目标是研发出技术先进、质量稳定、价格合理的试剂精品。公司的创立宗旨是技术至上、质量至上、服务至上，公司的产品研发团队均为高学历并在海外有长期的科研经验；公司的管理团队已在行业内拥有超过20年管理经验；同样，公司的运营团队也有丰富的执行经验。

北京天恩泽公司充分了解客户的需求，并努力创新以满足客户不断发展的需求。我们将与我们的客户共同成长，成为生物技术领域中zhuoyue产品和服务的jijia提供者。

DNAout、RNAout、Erasol、天净沙、克必隆、归去来、好亦多均为天恩泽基因注册商标(试剂类)。

天恩泽 荧光及可视化RT-LAMP扩增试剂盒 200603-50，产品简介：

产品品牌：天恩泽

产品名称; 荧光及可视化RT-LAMP扩增试剂盒

产品货号：200603-50

产品规格：50次

产品价格：1590元

天恩泽 荧光及可视化RT-LAMP扩增试剂盒 200603-50，产品说明：

本产品是根据本公司的双染料 RT-LAMPzhuanli技术开发的荧光和可见光双 模式RT-LAMP扩增及检测试剂盒，它既可以用于荧光RT-LAMP扩增及检测， 也可以用于可视化 RT-LAMP 扩增及检测，适用于各种针对核酸的快速定性检 测。本产品具有下列特点：

一般60分钟内出结果（取决于靶分子浓度），比RT-PCR快约1小时 20 μL的反应体系，大样品加样量达到14 μL。

3. 含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果， 也可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。

4. 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。

5. 特异性比RT-PCR高，因为RT-LAMP 扩增使用4-6条引物而不是两条。6. 灵敏性可达10拷贝/反应以下（随引物而不同），故假阴性率更低。

7. 本产品跟北京天恩泽的多种免提取试剂盒（如免提病毒保存液）兼容。

8. 只可用于科研，只可进行定性检测，不能用于定量检测。

9. 本产品只适用于RT-LAMP 检测，不适用于进行RT-LAMP检测。

10. 本产品足够50次20 μL体系的荧光及可视化RT-LAMP 扩增。

天恩泽 荧光及可视化RT-LAMP扩增试剂盒 200603-50，产品规格及成分：

运输及保存 低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂 RT-LAMP模板及RT-LAMP 引物、PCR级石蜡油 （仅对使用金属浴或水浴者） 。

天恩泽 荧光及可视化RT-LAMP扩增试剂盒 200603-50，使用方法：

准备工作：如果使用水浴锅或金属浴，需要在实验启动前打开并调到65℃。如 果用金属浴，还必须在孔中加水以填充金属孔和反应管间的空隙。本公司发现 很多水浴锅或金属浴温度不准，故建议先用阳性对照和阴性对照测试所用仪器 在60℃、62.5℃、65℃、67.5℃和70℃五个温度下扩增效果，选择阳性和阴 性颜色差异大的温度进行扩增

一、样品RNA的制备

1. 用自选方法纯化样品 RNA，本试剂盒跟市场上大多数 RNA 提取试剂盒兼 容，可以选购本公司的各种免提取试剂盒。

2. 如果有 N 个样品，则至少需要做 N+2 个样品制备，包括一个制备阳性对 照（制备时加入自备的跟要检测的靶分子相同的阳性对照模板，一起经历提取过程）和一个制备阴性对照（用水替代样品）。后N+2个样品一起 进行RNA 提取操作，得到N+2个RNA 样品。 二、配制并测试自备的20×RT-LAMP引物混合液

3. 用超纯水将自备的6种（或4种）RT-LAMP引物干粉稀释到母液浓度（100 μM），然后按下表配制100μL的20×RT-LAMP引物混合液，此混合液 足够 100 次 20 μL 体系的 RT-LAMP 扩增。如果需要配制的 20× RT-LAMP引物混合液体积异于100 μL，则各成分的用量请按比例调整。 引物混合液可以在-20℃放置2年。

注意：总体积为100 μL。如果自备的RT-LAMP引物不含Loop引物，则按 上表配制时Loop用超纯水替代，使得总体积为100 μL。

4. 测试引物的非特异扩增：在加模板和不加模板（至少1000拷贝/反应）的 RT-LAMP 系统中测试引物效果，引物选择标准可以自己掌握，keyi选择 无模板反应的Ct值比有模板反应的Ct值大60以上（每个循环1 分钟） 的引物对。根据结果设定判断阴性和阳性结果的阈值（本产品只用于定性）。 如果没有 qPCR仪器，只能用肉眼检测，则无需设定阈值，届时靠跟阳性 对照和阴性对照管的颜色来判断。

三、RT-LAMP扩增（20 μL体系）

5. 反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则keyi设置N+5个RT-LAMP 扩增，增加扩增阳性对照、无模板对照和无引物对照各 1 个。在 N+5 个 0.2mL的PCR管中加入下列成分：

6. 混匀后进行扩增，可以根据实验室条件选择下列两种方式进行扩增和检测。

7. 如使用金属浴、水浴或普通无热盖 PCR 仪，则每管加 30μL 石蜡油，再 65℃保温120分钟。如不加石蜡油，保温期间水分蒸发，会有非特异扩增。

8. 如果使用荧光定量 PCR 仪：聚合温度设为 65℃，1 次循环 1 分钟，120 个循环，每分钟在FAM通道采集一次荧光信号。

三、结果分析及解读

9. 阈值设定：在*分钟荧光值会升高再稳定，故只能取第10到15分钟 的荧光值作阈值。此现象估计是常温下可见光染料和荧光染料结合并对后 者有淬灭作用，加热到65℃后两种染料分开，淬灭逐渐解除，荧光逐渐升 高，10分钟后稳定。没加可见光染料的反应无此现象。

10. 所有阳性对照有阳性结果（Ct在阈值以内或反应液呈蓝色），所有阴性对 照有阴性结果（Ct大于阈值或反应液呈淡蓝色），否则提取实验或扩增实 验无效。需要寻找原因或跟厂家联系，暂时不需要分析样品的结果。

11. 如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。如果 肉眼观察，样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明有扩增有靶分子，如 果接近无模板和无引物的阴性对照，则说明无扩增无靶分子。反应结果示 例如下（9为阴性，10为阳性）：

12. 如果是用荧光PCR仪，样品Ct将小于阈值则为阳性，大于阈值则为阴性。

13. 当实时荧光检测和可视化检测同时使用时，如果不一致，以实时荧光 RT-LAMP的数据为准。一般可视化结果滞后实时荧光检测结果20-30分 钟，也就是说，在 qPCR 仪上第 30 分钟时呈现阳性的样品，其颜色变化 在第50-60分钟时才能观察到。

关联产品 免核酸纯化病毒保存液，PCR级石蜡油

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