qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit

cDNA合成和gDNA去除仅用20分钟完成有效去除基因组DNA，无需设计RNA特异性引物或探针高特异性，即便是低丰度的转录本也能获得高产量的cDNA转录本的5' 和3' 端区域都可以进行cDNA 合成

For 50 x 20 ul reactions: 100 ul 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 ul Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 ul 5x Quantiscript RT Buffer, 50 ul RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water

逆转录试剂盒组分确保高效、高灵敏的Real-Time RT-PCR

组分	优点
gDNA Wipeout Buffer	仅在real-time RT-PCR 中检测RNA
Quantiscript Reverse Transcriptase	可用于广泛RNA起始量（10 pg to 1 µg RNA），高特异性
Quantiscript RT Buffer	可通读困难模板
RT Primer Mix	所有转录本区域合成cDNA, 甚至从5' 端区域

qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit原理

为获得准确的real-time RT-PCR基因表达分析结果，很重要的是仅扩增和检测cDNA。基因组DNA的干扰可通过设计横跨外显子/外显子边界的引物或探针避免。尽管如此，在某些特殊情况下（如：cDNA来自一个单外显子基因），起始RNA样品必须无基因组DNA。

使用QuantiTect Reverse Transcription Kit，基因组DNA污染物可使用*的gDNA去除缓冲液迅速有效的去除（见图：“高效去除基因组DNA，确保精确的Real-Time RT-PCR”）。因为纯化RNA样品后无需另外采用DNA酶消化，从而可节省时间和费用。并且也无需设计RNA特异性引物和探针。

低丰度转录本获得更高产量的cDNA

	CT values for IL12A （low expression）		CT values for IL1RN （higher expression）
Input RNA （ng）	QIAGEN	Supplier AII	QIAGEN	Supplier AII
1000	30.9	32.0	23.1	24.9
100	34.2	35.4	26.3	26.6
10	37.8	46.8	29.7	30.3
1	N.D.	N.D.	32.4	34.5

应用Real-time，两步法RT-PCR 分析IL12A 和IL1RN，起始RNA量不同 。应用QuantiTect Reverse Transcription Kit 或来自供应商Supplier A_II的试剂盒逆转录总 RNA 。在 ABI PRISM 7900 上应用的QuantiTect Probe PCR Kit 、IL12A或 IL1RN的 QuantiTect Gene Expression Assays 分析合成的。 应用凯杰试剂盒C_T值较低，尤其中等丰度的基因IL12A（粗体），cDNA产量更高。N.D.：未检测（Not detected）。

RT Primer Mix包含有特别优化的oligo-dT和随机引物的混合物，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，甚至可从5'区域开始（见图：“高灵敏度检测12.5 kb 转录本5'区域的靶分子”）。相对于其他供应商提供的试剂盒来说，QuantiTect Reverse Transcription Kit为real-time PCR分析提供高产量的cDNA，无需考虑待扩增目标序列位于转录本的哪个区域。同时，QuantiTect Reverse Transcription Kit也确保了real-time RT-PCR结果更好的重复性。

操作流程

使用QuantiTect逆转录试剂盒可在20分钟内去除基因组DNA和合成cDNA（见流程图）。由于两个反应均在同一孵育温度并使用预混液构建反应，因此操作过程快速且方便。相反，供应商I提供的试剂盒操作需更多移液步骤且经常需要调整孵育温度，因此需要更长时间和更多手动操作。

应用

QuantiTect Reverse Transcription Kit可从各种类型的起始样品中合成cDNA以实现高效和高灵敏度的real-time RT-PCR，包括激光显微切割样品和活组织切片样品。与其他供应商提供的试剂相比，QuantiTect Reverse Transcription Kit在检测低丰度基因时具有更高的灵敏度（见图：“Real-Time，两步法RT-PCR精确度更高”）。

为获得高特异性和高灵敏度的real-time RT-PCR结果，又避免耗时的反应步骤优化过程，我们推荐QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect产品联合使用。包括经优化的PCR反应预混液和即用型引物，使用SYBR Green染料法或序列特异性探针法进行 real-time RT-PCR。

Images

高效去除基因组DNA，确保精确的Real-Time RT-PCR — A 高灵敏度检测12.5 kb转录本5'区域的靶分子 快速方便的cDNA合成 高灵敏度的Real-Time，两步法RT-PCR

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